Prestatiebeoordeling Van De Kolom; Hetp-Berekening - Ge Healthcare Axichrom 140 Gebruiksaanwijzing
Inhoudsopgave
5.3
Prestatiebeoordeling van de kolom
Achtergrond
De efficiëntie van een kolom hangt af van hoe goed de pakking is. Een slecht gepakte
kolom leidt tot onregelmatige stroming, wat leidt tot bredere zones en verminderde re-
solutie. Een kolomefficiëntietest moet onmiddellijk na het pakken en met regelmatige
tussenpozen worden uitgevoerd gedurende de levensduur van het gepakte bed. De test
is tevens nuttig wanneer de scheidingsprestatie zichtbaar achteruitgaat. Slechte testre-
sultaten geven aan dat het medium opnieuw moet worden gepakt of moet worden
vervangen.
Een vaak toegepast methode voor het uitdrukken van de efficiëntie van een gepakt bed
is de hoogte-equivalent tot een theoretische plaat (HETP) en de piek-asymmetriefactor
(
). Deze waarden kunnen eenvoudig worden bepaald met een monster zoals aceton of
s
een natriumchloride-oplossing door de kolom te leiden.
Opmerking:
Het monstervolume moet ongeveer 1 tot 2% van het totale bedvolume zijn, en men kan
1 tot 2% v/v aceton gebruiken. Als alternatief kunt u 0,8 M natriumchloride of een verge-
lijkbare stof toepassen op een 0,4 M NaCl elutiebuffer, afhankelijk van het gebruikte
medium. Gebruik een vloeistofsnelheid van 30 tot 40 cm/u voor 34 µm en 50 µm media
en 20 cm/u voor 75 en 90 µm media. Het uitvoeren van een HETP-test bij een hogere
snelheid of met gebruik van een groter monstervolume zal zowel de HETP- als de
A
-waarden beïnvloeden. De ontluchter en eventuele filters moeten tijdens toepassing
S
van het monster worden uitgeschakeld om terugmenging te voorkomen.
HETP-berekening
Bereken als volgt de hoogte-equivalent van een theoretische plaat (HETP) en de asym-
metriefactor (A
als monster als volgt:
HETP = L/N
N=5,54 (V
Variabele
L
N
V
R
AxiChrom 140- en 200-kolommen Bedieningsinstructies 28-9431-23 AG
Het is belangrijk dat de kolom goed geëquilibreerd is voordat de pakking
geëvalueerd wordt.
) uit de geleidings- of UV-curve wanneer natriumchloride wordt gebruikt
S
2
/w
)
R
h
Betekenis
Bedhoogte
Plaatnummer
Retentievolume
5.3 Prestatiebeoordeling van de kolom
5 Gebruik
91
Inhoudsopgave
